类鼻疽检测

检测项目

1. 细菌分离培养：采用Ashdown选择性培养基进行72小时35℃微需氧培养，观察典型菌落形态及金属光泽

2. PCR核酸检测：针对TTS1基因簇(orf11)设计引物，扩增产物长度217bp，Ct值≤35判定阳性

3. 血清学抗体检测：间接荧光抗体试验(IFAT)测定IgG/IgM效价≥1:160为阳性临界值

4. 药敏试验：采用E-test法测定对亚胺培南(0.002-32μg/mL)、多西环素(0.016-256μg/mL)等抗生素的MIC值

5. 抗原快速检测：胶体金免疫层析法检测BimA蛋白抗原，灵敏度≥95%

检测范围

1. 临床样本：血液/血清(EDTA抗凝)、痰液/支气管肺泡灌洗液(无菌容器)、脓肿穿刺液(冷藏运输)

2. 环境样本：土壤悬液(按1:10 PBS稀释)、水体滤膜(0.45μm孔径滤膜富集)

3. 动物样本：猪/羊脏器组织匀浆液(含10%甘油保存液)、啮齿类动物脾脏印片

4. 食品样本：生鲜肉类表面拭子(Stomacher均质处理)、乳制品离心沉淀物

5. 医疗用品：手术器械生物膜采样(超声震荡法提取)

检测方法

ISO 11737-1:2018《医疗产品灭菌-微生物学方法-第1部分：产品上微生物总数的测定》

ASTM F3172-15《评估抗菌剂对生物膜内细菌效力的标准指南》

GB/T 4789.28-2013《食品卫生微生物学检验培养基和试剂的质量要求》

GB/T 19438.1-2004《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》(适配改良)

WS/T 797-2022《人间传染的病原微生物菌毒种保藏机构技术要求》

检测设备

1. Bio-Rad CFX96实时荧光定量PCR仪：支持FAM/HEX双通道荧光检测，温控精度±0.2℃

2. Thermo Scientific Heratherm微生物培养箱：温度范围20-60℃，CO₂浓度控制±0.1%

3. BioTek Synergy H1多功能酶标仪：具备紫外/可见光双模式扫描功能

4. Bruker MALDI-TOF MS微生物鉴定系统：数据库含B.pseudomallei特征峰(m/z 6715,9732)

5. Eppendorf 5430 R高速冷冻离心机：最大转速30,000rpm，温控范围-20℃至40℃

6. Nikon Eclipse Ci-L显微镜配置100×油镜及荧光模块

7. BD BACTEC FX40全自动血培养系统：支持需氧/厌氧双模式培养

8. Sartorius Millipore微生物过滤装置(47mm滤杯)

9. Hamilton MICROLAB STARlet自动移液工作站：精度±0.5μL

10. Memmert UN110恒温摇床：振幅20mm/50mm可调